三重四极杆液相色谱/串联质谱仪（LC-MS 8050，日本Shimadzu公司）；多管涡旋混合仪（DMT-2500，杭州米欧仪器有限公司）；高速冷冻离心机（ST16R，美国Thermo Fisher公司）；超纯水机（美国Millipore 公司）；ACQUITY UPLC HSS T3色谱柱（美国Waters公司，2.1 mm×100 mm，1.8 μm）；ACQUITY UPLC BEH C18色谱柱（美国Waters公司，2.1 mm×100 mm，1.7 μm）。

非洛地平、尼索地平、尼群地平、硝苯地平、盐酸可乐定、阿替洛尔、盐酸苯乙双胍、吡格列酮、格列美脲、格列喹酮、格列波脲、尼莫地平、氨氯地平、芬氟拉明、甲苯磺丁脲、格列本脲、格列齐特、格列吡嗪、瑞格列奈、罗格列酮、盐酸丁二胍、哌唑嗪、麻黄碱、酚酞、氯苯那敏、佐匹克隆、文拉法辛、青藤碱、罗通定、盐酸二甲双胍、西布曲明、磺胺吡啶、磺胺甲基嘧啶、磺胺二甲嘧啶、环丙沙星、恩诺沙星、氧氟沙星、洛美沙星、甲氧苄氨嘧啶、避蚊胺（德国Dr.Ehrenstorfer和美国CATO公司，纯度≥95%）；乙腈、甲醇、甲酸（美国Thermo Fisher公司，HPLC级）；无水硫酸钠（上海凌峰化学试剂有限公司，分析纯）；C₁₈、PSA（上海安谱实验科技股份有限公司，粒径为40—63 μm）；GCB（上海安谱实验科技股份有限公司，粒径为120—400 μm）。

准确称取50 mg（精确至0.1 mg）各标准品分别于50 mL容量瓶，用甲醇溶解，配制成l000 mg·L⁻¹标储备溶液，置于棕色储液瓶中于−18 ℃避光保存。根据需要，用空白基质提取液稀释成适当浓度的混合标准工作液，现配现用。

样品为市售贻贝、溢蛏和菲律宾蛤仔。用纯水洗净外壳泥沙，切开闭壳肌，取出整个软体部分，均质混匀，于−20 ℃下保存备用。

准确称取2.00 g样品于50 mL离心管中，加入10 mL乙腈和5 g无水硫酸钠，涡旋提取10 min，8000 r·min⁻¹转速下离心5 min。准确移取上清液8 mL，置于装有200 mg PSA、100 mg C₁₈和500 mg无水硫酸钠的15 mL离心管中，涡旋2 min，8000 r·min⁻¹ 离心3 min。准确移取4 mL上清液于40 ℃下氮吹至近干，然后用1 mL初始流动相复溶，过0.22 μm滤膜，待测。

色谱柱：ACQUITY UPLC HSS T3色谱柱；流动相：A相为0.1% 甲酸溶液，B相为甲醇；流速：0.3 mL·min⁻¹；梯度洗脱条件：0—0.5 min，7% B；0.5—3.0 min，7%—45% B；3.0—4.5 min，45%—90% B；4.5—5.0 min，90% B；5.0—5.5 min，90% B—7% B。进样量：3 μL；柱温：35 ℃。

电喷雾离子源（ESI），温度：400 ℃，毛细管电压：4000 V；扫描方式：正离子模式；雾化气流量：3.0 L·min⁻¹；加热气流量：10.0 L·min⁻¹；定性与定量离子对、碰撞能量等参数见表1。

取1 mg·L⁻¹单一标准溶液在正离子模式下对进行全扫描，得到各目标物的母离子。再对母离子进行二级质谱扫描，选择相对丰度较高且稳定的两个离子分别作为定量、定性离子，以满足欧盟2002/657 /EC指令的规定，即保证检测须达到4个确证点的要求。最后通过优化各种质谱参数，获得最佳的质谱条件，结果见表1。

实验比较了ACQUITY UPLC HSS T3和ACQUITY UPLC BEH C18两种色谱柱对40种PPCPs的分离效果。结果显示，在相同的流动相条件下，对于盐酸苯乙双胍、盐酸二甲双胍和盐酸丁二胍等极性较强的目标物，在HSS T3色谱柱上峰型更尖锐，而且HSS T3色谱柱可以耐受高比例水相，因此选择HSS T3色谱柱作进一步的色谱条件优化。

考虑到40种PPCPs均采用正离子模式进行测定，在流动相中加入一定量的甲酸可以增加目标物的离子化效率。实验考察了甲醇-水、乙腈-水、甲醇-0.1%甲酸溶液、乙腈-0.1%甲酸溶液4种流动相体系对目标物的分离度和灵敏度的影响。结果表明，选择甲醇-0.1%甲酸溶液作为流动相时分离效果更好，目标物响应值更高，因此选择甲醇-0.1%甲酸溶液作为流动相。

实验考察了甲醇、乙腈这两种QuEChERS法常用提取溶剂的提取效果。结果表明，两者的提取效率相当，但考虑到双壳类水产品中存在大量的蛋白质，而乙腈具有良好的沉淀蛋白质的能力，有利于后续QuEChERS净化，因此选择乙腈作为提取溶剂。

双壳类水产品样品基质复杂，虽然通过乙腈提取去除了大部分蛋白质，但仍存在少量脂类、色素及糖类等杂质。QuEChERS法常用的吸附剂有C₁₈、GCB及PSA等。其中C₁₈主要用于去除样品中的脂类等非极性有机物，PSA可去除样品中的色素、糖类以及有机酸等成分，GCB可去除样品中的色素、甾醇等物质。实验选用溢蛏作为基质，比较了C₁₈、GCB及PSA各150 mg时的净化效果。结果表明，GCB虽然可以有效净化样品，但对大部分目标物有较强的吸附能力，从而使目标物回收率大大降低；采用C₁₈、PSA进行净化均获得理想的净化效果，且对回收率的影响较小。

进一步对C₁₈、PSA 吸附剂的用量进行优化。分别对比了50、100、150、200、250 mg C₁₈和PSA对目标物的影响。结果表明，吸附剂加入量较小时，无法充分净化；吸附剂加入量过多，虽然能够除去杂质干扰，但也会吸附目标物而使回收率降低；而当PSA和C₁₈用量分别为200 mg、100 mg时，杂质干扰最小、平均回收率最高。因此选择200 mg PSA、100 mg C₁₈作为吸附剂组合。

基质效应（Matrix effect，ME）是基质中除目标物以外的其他成分对目标物分析准确性的影响，不同的基质对于目标物的离子化效率不同，通常有基质抑制和基质增强两种表现形式。本实验分别配制贻贝、缢蛏和菲律宾蛤仔的空白基质匹配标准曲线以及对应质量浓度的纯溶剂标准曲线，按下列公式计算基质效应（ME）：ME=基质匹配标准曲线的斜率/纯溶剂标准曲线的斜率×100%。若斜率在80%—120%之间，基质效应可以忽略；若斜率大于120%或低于80%时，说明存在较强的基质增强或抑制效果。结果表明，贻贝和菲律宾蛤仔所有目标物的ME在80.4%—93.6%之间，基质效应不明显；缢蛏有34种目标物ME小于80%，ME在53.3%—85.4%之间，基质抑制效应显著，这可能是与缢蛏的富集能力更强有关。消除基质效应的方法主要有同位素内标法和基质匹配标准溶液法，考虑到目标物化学性质各异，现有的同位素无法完全对应，因此选择基质匹配外标校准曲线对样品中的目标物进行定量，以抵消基质效应的影响。

配制系列基质匹配混合标准溶液，在优化的分析条件下进行检测。以定量离子的峰面积为纵坐标（y），以相应的质量浓度（μg·L⁻¹）为横坐标（x），绘制标准曲线（表2）。在0.5—100 μg·L⁻¹范围内，40种PPCPs线性关系良好，相关系数（r）为0.994—0.999。在最低添加水平下，以3倍信噪比确定方法检出限（LOD）为0.04—6 μg·kg⁻¹，以10倍信噪比确定方法定量限（LOQ）为0.1—19 μg·kg⁻¹。

采用标准加入法，取已制备均匀贻贝、溢蛏和菲律宾蛤仔空白样品，准确添加40种PPCPs的混合标准溶液，使得样品中PPCPs的浓度分别为20、50、100 μg·kg⁻¹，按上述优化后的方法进行检测。结果表明，贻贝的平均加标回收率为76.9%—107%，RSD为1.4%—7.6%；缢蛏的平均加标回收率为84.3%—110%，RSD为1.2%—9.5%；菲律宾蛤仔的平均加标回收率为77.7%—91.1%，RSD为2.4%—7.6%，满足GB/T 27404-2008《实验室质量控制规范食品理化检测》的技术要求。

应用本方法对30批双壳类水产品，包括12批次贻贝、10批次缢蛏和8批次菲律宾蛤仔进行检测，共有3种PPCPs有不同程度的检出，不同种类双壳类水产品间PPCPs分布没有明显差异。其中环丙沙星检出率最高，为76.7%，浓度为8.4—24.7 μg·kg⁻¹；其次是甲氧苄氨嘧啶（56.7%）和磺胺二甲嘧啶（43.3%），浓度分别为1.8—14.3 μg·kg⁻¹和3.7—18.0 μg·kg⁻¹。分析原因可能是有，环丙沙星作为人畜共用抗生素在医疗、养殖领域用量较大，释放到水体中可强吸附在悬浮物上^[22]，容易被双壳类水产品滤食后在体内富集；磺胺二甲嘧啶是一种磺胺类抗生素、甲氧苄氨嘧啶是磺胺类药物的增效剂，具有广谱抗菌、价格低廉等特点，在畜牧养殖和水产养殖等应用广泛；虽然检测结果与相关文献报道一致^[23]，但含量普遍较低，可能是样品采购时间为夏季，此时双壳类水产品正处于繁殖期，体内脂肪含量较低，不利于脂溶性PPCPs的累积。

利用QuEChERS技术结合超高效液相色谱-三重四极杆质谱建立同时测定双壳类水产品中40种PPCPs残留的分析方法。该方法样品前处理简单，分析速度快，有机试剂用量少，准确度度和灵敏度高，可用于环境监测及水产品质量检测。